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      小鼠糖链抗原19-9(CA19-9)试剂盒使用说明书

      点击次数:332 发布时间:2015/8/5
      提 供 商: 上海康朗生物科技有限公司 资料大小:
      图片类型: 下载次数: 47
      资料类型: PDF 浏览次数: 332
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      小鼠糖链抗原19-9(CA19-9)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
      本试剂盒仅供研究使用。
      检测范围: 96T
      0.2U/ml - 9U/ml
      使用目的:
      本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中糖链抗原19-9(CA19-9)含量。
      实验原理
      本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠糖链抗原19-9(CA19-9)水平。用纯化的抗体
      包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入糖链抗原19-9(CA19-9),再与
      HRP 标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
      TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样
      品中的糖链抗原19-9(CA19-9)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),
      通过标准曲线计算样品中小鼠糖链抗原19-9(CA19-9)浓度。
      试剂盒组成
      1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
      2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品(16U/ml) 0.5ml×1 瓶
      3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
      4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
      5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
      6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
      标本要求
      1. 血清:
      室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保
      存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
      2. 血浆:
      应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20
      分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
      尿液:
      用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀
      形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
      4.细胞培养上清:
      检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。
      5.培养细胞:
      检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。
      通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左
      右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
      6.组织标本:
      切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
      后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
      浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检
      测,其余冷冻备用。
      7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进
      行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
      8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
      操作步骤
      1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
      释。
      8U/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
      4U/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
      2U/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
      1.0U/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
      0.5U/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
      2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
      待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,
      然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
      量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
      3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
      4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
      5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
      重复5 次,拍干。
      6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
      7. 温育:操作同3。
      8. 洗涤:操作同5。
      9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
      10 分钟.
      10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
      11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止
      液后15 分钟以内进行。
      操作程序总结:
      计算
      以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
      OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标
      准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
      即为样品的实际浓度。
      注意事项
      1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
      用完,板条应装入密封袋中保存。
      2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
      3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好
      控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
      4. 请每次测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值
      大于标准品孔*孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计
      算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
      5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
      6.底物请避光保存。
      7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
      8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
      9.本试剂不同批号组分不得混用。
      保存条件及有效期
      1.试剂盒保存:;2-8℃。
      2.有效期:6 个月

       

      上海康朗生物科技有限公司主营:Elisa试剂盒,人Elisa试剂盒,大鼠Elisa试剂盒,小鼠Elisa试剂盒,猪Elisa试剂盒,细胞,生物细胞学等科研产品
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